HPLC和LC/MS 緩沖液選擇指南：pH值的實(shí)際影響

一般情況下，根據(jù)色譜柱和樣品的特性，建議采用流動(dòng)相pH值在2-3的范圍內(nèi)進(jìn)行方法開發(fā)。

在這一pH范圍下，大多數(shù)有機(jī)酸的電離將被抑制，而且色譜柱上的硅烷醇基團(tuán)的電離也將受到抑制。

在這些條件下，堿基會(huì)被電離，但是大多數(shù)堿性化合物的pKa>7，因此如果在pH太高的情況下抑制電離會(huì)有害于大多數(shù)的色譜柱。

所以，在其它條件相同的情況下，最好是從較低的pH值開始。

如果您需要在高pH值下操作色譜柱，請(qǐng)確保所選色譜柱在您操作的pH區(qū)域內(nèi)可以保持穩(wěn)定。

如果低pH電離抑制無法提供可接受的結(jié)果，則可以調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH，以獲得理想的分離效果。然而最具成效的是：調(diào)整流動(dòng)相的有機(jī)物含量（％B溶
劑），從而獲得中性和非離子化合物可接受的保留時(shí)間；然后調(diào)整pH，進(jìn)而微調(diào)離子分析物的保留時(shí)間。