液相色譜柱用完后的正確沖洗（清洗、保存）對于延長色譜柱壽命、避免交叉污染、保證下一次分析的準確性極為重要。下面以反相色譜柱（如C18柱）為例，介紹常規(guī)HPLC柱子的沖洗步驟和注意事項：

一、沖洗流程

1. 停止進樣、去除樣品

停止進樣，確保色譜柱中沒有殘留新樣品注入。

2. 切換至流動相A（低鹽、無緩沖液）

若所用流動相含有緩沖鹽或強酸（堿），用不含鹽的流動相A（如純水/甲醇、純水/乙腈等）沖洗5-10分鐘，去除鹽分，防止鹽析于填料造成破壞。

3. 有機溶劑比例遞增

逐步增加有機溶劑比例（如甲醇或乙腈），可以采用10%→30%→50%→70%→100%的流程，每一步持續(xù)3-5柱體積（依據(jù)色譜柱內(nèi)徑和長度校算）。

沖洗高比例有機溶劑，能將柱子中的疏水性污染物等徹底洗脫。

4. 必要時采用不同溶劑清洗

若遇到難溶的化合物，可依次用其他清洗劑，如異丙醇、丙酮、極性更強的溶劑（依據(jù)色譜柱說明書選擇，避免破壞硅膠基體）。

5. 最后用保存溶液沖洗

清洗完畢后，用推薦的色譜柱保存液（一般為甲醇或乙腈）充分沖洗，填充后密封保存。

二、常見C18柱沖洗方案舉例

剛完成反相流動相（如水/乙腈）實驗，可直接用100%乙腈沖洗20-30分鐘。

若含緩沖鹽，先用50%水/乙腈沖洗，確保鹽分排出，再過渡至100%乙腈沖洗。

嚴重污染時，可嘗試如下溶劑依次沖洗：

水 → 甲醇 → 異丙醇 → 純甲醇（或純乙腈）

注意逆向（正向）清洗要根據(jù)柱廠說明操作。

柱子長期不用時，以乙腈（或廠家推薦的保存液）封存。

三、注意事項

勿用超高流速沖洗，流速過大易損傷色譜柱填料，一般保持正常分析流速或略低流速。

避免非兼容溶劑混合，如水和氯仿等混合會分層，應(yīng)按柱子說明書推薦溶劑使用。

柱溫應(yīng)維持在常溫或廠家推薦溫度，避免驟然升溫或降溫。

實驗室需用高純度溶劑和去離子水，溶液需過濾（0.45μm濾膜）與脫氣，減少顆粒和氣泡。

沖洗過程中隨時觀察柱壓變化，如遇堵塞或異常壓力應(yīng)馬上處理。

四、特殊柱型補充

正相柱（硅膠柱）：最后一般以己烷保存，沖洗時可依次用極性增大的有機溶劑（如己烷→異丙醇→甲醇）。

離子交換柱、親水作用色譜柱（HILIC）：沖洗與保存方式更為特殊，須嚴格查閱說明書。